주요 품질 속성
ADC 약물은 주로 세 가지 구성 요소로 구성됩니다. 1. 특정 타겟팅 항체; 2. 고역가 세포독성 약물; 3. 링커. ADC 약물은 복잡한 구조와 강한 이질성을 가지고 있으며, 다양한 제품 관련 불순물을 포함하므로 주요 품질 속성을 결정하는 것이 중요합니다.
DAR(약물 대 항체 비율)
DAR은 항체에 결합된 세포독성 약물의 평균 수를 나타내며 중요한 품질 속성입니다. 낮은 약물 부하(낮은 DAR)는 ADC의 효능을 감소시키는 반면, 높은 약물 부하(높은 DAR)는 ADC 분자의 약동학 및 독성을 변화시킵니다. 커플링 반응, 특히 반응물의 농도를 제어하면 DAR(특히 무작위 커플링의 경우)이 변하게 되는데, 이는 ADC 개발에서 가장 중요한 단계입니다. 생산 후 처리/처리 제어는 비접합된 네이키드 항체 및 낮음/높음 DAR 생성물을 줄이고 DAR을 목표 범위 내에서 제어하는 데 유익합니다. 따라서 약물 부하 및 약물 분포는 ADC 생산에서 제어해야 하는 CQA입니다. 분광법, 방사선, 크로마토그래피, 질량 분석법 등이 일반적으로 사용되는 분석 방법입니다.
UV-Vis 분광법
자외선 가시광선 분광법은 DAR 측정에 간단하고 가장 일반적으로 사용되는 방법입니다. 이 방법의 전제 조건은 다음과 같습니다. 1) 약물에는 자외선 흡수 그룹이 포함되어야 합니다. 2) 약물과 항체는 자외선-가시광선 스펙트럼에서 명확한 독립적인 최대 흡수 피크를 보입니다. 3) 약물의 존재는 ADC 샘플에서 항체의 광 흡수 특성에 영향을 미치지 않아야 하며 그 반대의 경우도 마찬가지입니다.
측정된 흡광도와 소광 계수에 따라 Beer-Lambert 원리에 따라 단백질과 약물의 농도를 계산할 수 있으며, 이에 따라 평균 DAR을 계산할 수 있습니다.
질량 분석법
질량 분석법은 DAR을 분석하는 데 일반적으로 사용되는 또 다른 방법입니다. 현재 전기 분무 이온화 질량 분석법(ESI), 비행 시간형 질량 분석법(TOF) 또는 Orbitrap이 ADC의 이질 분자 종을 구별하는 데 사용됩니다. 평균 DAR은 질량 분석법에 의해 결정된 분자량과 해당 피크 면적을 기반으로 계산할 수 있습니다.
약물 부하 분포
전체 약물 부하 분포는 완전한 질량 분석으로 특징지어질 수 있으며, 시스테인이나 다른 부위 특이적 결합에 의해 생성된 덜 이질적인 ADC도 소수성 상호 작용 크로마토그래피로 분석할 수 있습니다. 각 결합 부위에서 약물 부하 분포를 결정하려면 펩타이드 맵과 같은 보다 포괄적인 분석이 필요합니다.
좋은 크로마토그래피 분리가 달성되면, 액체 크로마토그래피를 사용하여 커플링 부위의 점유에 대한 정확한 정보를 얻을 수 있습니다. 입체 장애와 구조적 변화로 인해, 결합된 화합물은 단백질 가수분해의 효율성에 영향을 미칠 수 있다는 점을 지적해야 합니다. 따라서 연속 또는 병렬 처리에서 ADC 약물을 가수분해하기 위해 두 번째 효소를 사용해야 합니다.
무작위 결합이 있는 ADC의 경우, 접합된 약물의 흡수 피크와 네이키드 항체의 흡수 피크가 겹치지 않으면 ADC의 펩타이드 맵을 사용하여 약물에 결합된 펩타이드를 비교하고 찾을 수 있습니다. LC-MS 분석은 펩타이드의 위치와 약물 분자에 결합된 결합 부위를 결정할 수 있습니다.