항체-약물 접합체(ADC)는 링커를 통해 세포독성 소분자 약물과 표적 모노클로날 항체의 접합체입니다. 항체의 특이성은 소분자 약물의 독성을 줄이고 치료적 창을 늘립니다. 지난 2년 동안 ADC 약물은 획기적인 진전을 이루었고, 여러 약물이 마케팅 승인을 받았습니다 베르가못추출물.

주요 품질 속성

ADC 약물은 주로 세 가지 구성 요소로 구성됩니다. 1. 특정 타겟팅 항체; 2. 고역가 세포독성 약물; 3. 링커. ADC 약물은 복잡한 구조와 강한 이질성을 가지고 있으며, 다양한 제품 관련 불순물을 포함하므로 주요 품질 속성을 결정하는 것이 중요합니다.

DAR(약물 대 항체 비율)

DAR은 항체에 결합된 세포독성 약물의 평균 수를 나타내며 중요한 품질 속성입니다. 낮은 약물 부하(낮은 DAR)는 ADC의 효능을 감소시키는 반면, 높은 약물 부하(높은 DAR)는 ADC 분자의 약동학 및 독성을 변화시킵니다. 커플링 반응, 특히 반응물의 농도를 제어하면 DAR(특히 무작위 커플링의 경우)이 변하게 되는데, 이는 ADC 개발에서 가장 중요한 단계입니다. 생산 후 처리/처리 제어는 비접합된 네이키드 항체 및 낮음/높음 DAR 생성물을 줄이고 DAR을 목표 범위 내에서 제어하는 ​​데 유익합니다. 따라서 약물 부하 및 약물 분포는 ADC 생산에서 제어해야 하는 CQA입니다. 분광법, 방사선, 크로마토그래피, 질량 분석법 등이 일반적으로 사용되는 분석 방법입니다.

UV-Vis 분광법

자외선 가시광선 분광법은 DAR 측정에 간단하고 가장 일반적으로 사용되는 방법입니다. 이 방법의 전제 조건은 다음과 같습니다. 1) 약물에는 자외선 흡수 그룹이 포함되어야 합니다. 2) 약물과 항체는 자외선-가시광선 스펙트럼에서 명확한 독립적인 최대 흡수 피크를 보입니다. 3) 약물의 존재는 ADC 샘플에서 항체의 광 흡수 특성에 영향을 미치지 않아야 하며 그 반대의 경우도 마찬가지입니다.

측정된 흡광도와 소광 계수에 따라 Beer-Lambert 원리에 따라 단백질과 약물의 농도를 계산할 수 있으며, 이에 따라 평균 DAR을 계산할 수 있습니다.

질량 분석법

질량 분석법은 DAR을 분석하는 데 일반적으로 사용되는 또 다른 방법입니다. 현재 전기 분무 이온화 질량 분석법(ESI), 비행 시간형 질량 분석법(TOF) 또는 Orbitrap이 ADC의 이질 분자 종을 구별하는 데 사용됩니다. 평균 DAR은 질량 분석법에 의해 결정된 분자량과 해당 피크 면적을 기반으로 계산할 수 있습니다.

약물 부하 분포

전체 약물 부하 분포는 완전한 질량 분석으로 특징지어질 수 있으며, 시스테인이나 다른 부위 특이적 결합에 의해 생성된 덜 이질적인 ADC도 소수성 상호 작용 크로마토그래피로 분석할 수 있습니다. 각 결합 부위에서 약물 부하 분포를 결정하려면 펩타이드 맵과 같은 보다 포괄적인 분석이 필요합니다.

좋은 크로마토그래피 분리가 달성되면, 액체 크로마토그래피를 사용하여 커플링 부위의 점유에 대한 정확한 정보를 얻을 수 있습니다. 입체 장애와 구조적 변화로 인해, 결합된 화합물은 단백질 가수분해의 효율성에 영향을 미칠 수 있다는 점을 지적해야 합니다. 따라서 연속 또는 병렬 처리에서 ADC 약물을 가수분해하기 위해 두 번째 효소를 사용해야 합니다.

무작위 결합이 있는 ADC의 경우, 접합된 약물의 흡수 피크와 네이키드 항체의 흡수 피크가 겹치지 않으면 ADC의 펩타이드 맵을 사용하여 약물에 결합된 펩타이드를 비교하고 찾을 수 있습니다. LC-MS 분석은 펩타이드의 위치와 약물 분자에 결합된 결합 부위를 결정할 수 있습니다.