1. 배치 결정화
배치 결정화는 가장 오래되고 간단한 결정화 방법으로, 단백질 용액에 침전제를 동시에 첨가하여 용액을 즉시 높은 과포화 상태로 만드는 것입니다. 과포화 용액에서는 추가 처리 없이 점진적으로 결정을 성장시키는 것이 가능합니다. 마이크로 배치 결정화를 위한 자동화 시스템은 Chayen 등이 설계했습니다. 마이크로 배치 방법에서는 단백질과 침전제가 포함된 1~2μl의 액적에서 결정을 성장시킵니다. 물방울은 오일(예: 파라핀)에 부유하고 오일은 증발을 방지하는 씰 역할을 하며, 일반적인 침전제를 방해하지 않고 오일이 유기 용매를 용해시키는 것을 방해합니다.
2. 액체-액체 확산
이 방법은 녹는점을 측정하는 모세관인 작은 구멍이 있는 모세관에 단백질 용액과 침전제가 포함된 용액을 층층이 쌓는 방식이다. 하부층은 농축 황산암모늄 또는 PEG 용액과 같은 밀도가 높은 용액입니다. MPD와 같은 유기용매를 침전제로 사용하면 상부층에 있게 됩니다. 1:1 혼합의 경우 침전제 농도는 최종 농도의 두 배가 되어야 합니다. 두 용액(각각 약 5μl)을 주사기 바늘을 통해 모세관에 도입했습니다. 간단한 회전형 원심분리기로 기포를 제거할 수 있습니다. 그런 다음 상위 레이어를 추가하면 두 레이어 사이에 명확한 인터페이스가 형성되고 점차 서로 퍼집니다. 모레노와 다른 사람들은 침술에 대한 액체-액체 확산을 개발했습니다. 단백질 용액은 모세관력에 의해 한쪽 끝이 닫힌 좁은 튜브 안으로 빨려 들어갑니다. 다음으로, 열린 끝 부분을 큐벳에 넣은 겔에 삽입하고, 튜브가 수직이 되어 단백질 용액이 겔과 접촉하도록 겔을 설정합니다. 침전제 함유 용액을 겔 위에 붓고 증발을 방지하기 위해 전체 장치를 닫힌 상자에 보관합니다. 겔과 모세혈관을 통한 침전제의 확산 시간은 겔에 모세관이 삽입되는 깊이에 따라 제어될 수 있습니다. 따라서 모세관 바닥이 높고 상단이 낮은 단백질 용액에 과포화 영역이 형성됩니다. 이는 추가 정보의 최상의 결정화를 선별하는 데에도 사용될 수 있습니다. 튜브가 수직이 되고 단백질 용액이 겔과 접촉하도록 겔을 설정합니다. 침전제 함유 용액을 겔 위에 붓고 증발을 방지하기 위해 전체 장치를 닫힌 상자에 보관합니다. 겔과 모세혈관을 통한 침전제의 확산 시간은 겔에 모세관이 삽입되는 깊이에 따라 제어될 수 있습니다. 따라서 모세관 바닥이 높고 상단이 낮은 단백질 용액에 과포화 영역이 형성됩니다. 이는 추가 정보의 최상의 결정화를 선별하는 데에도 사용될 수 있습니다. 튜브가 수직이 되고 단백질 용액이 겔과 접촉하도록 겔을 설정합니다. 침전제 함유 용액을 겔 위에 붓고 증발을 방지하기 위해 전체 장치를 닫힌 상자에 보관합니다. 겔과 모세혈관을 통한 침전제의 확산 시간은 겔에 모세관이 삽입되는 깊이에 따라 제어될 수 있습니다. 따라서 모세관 바닥이 높고 상단이 낮은 단백질 용액에 과포화 영역이 형성됩니다. 이는 추가 정보의 최상의 결정화를 선별하는 데에도 사용될 수 있습니다. 겔과 모세혈관을 통한 침전제의 확산 시간은 겔에 모세관이 삽입되는 깊이에 따라 제어될 수 있습니다. 따라서 모세관 바닥이 높고 상단이 낮은 단백질 용액에 과포화 영역이 형성됩니다. 이는 추가 정보의 최상의 결정화를 선별하는 데에도 사용될 수 있습니다. 겔과 모세혈관을 통한 침전제의 확산 시간은 겔에 모세관이 삽입되는 깊이에 따라 제어될 수 있습니다. 따라서 모세관 바닥이 높고 상단이 낮은 단백질 용액에 과포화 영역이 형성됩니다. 이는 추가 정보의 최상의 결정화를 선별하는 데에도 사용될 수 있습니다.